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http://hdl.handle.net/1635/16360
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| Titre: | EVALUATION BIOLOGIQUE DE L’EFFICACITE ET DE LA TOLERANCE DES ANTICORPS MONOCLONAUX IN VITRO ET IN VIVO : APPLICATION AUX ANTI-CD20 |
| Auteur(s): | Ammi, Nassima
Djidjik, Réda
Thése Doctorat :pharmacie: Université Alger1: 2024 |
| Mots-clés: | éfficacité
Anti-CD20
Caractérisation fonctionnelle |
| Issue Date: | 24-Sep-2024 |
| Description: | Introduction: Face au développement émergent des anti CD20 et des biosimilaires du Rituximab, l'Algérie se
trouve face à la nécessité d'instaurer des techniques de caractérisation fonctionnelle et d'immunomonitoring de
ces agents thérapeutiques ; notre objectif est de mettre au point des méthodes d'évaluation in vitro des propriétés
de liaison du Rituximab au CD20, de sa cytotoxicité dépendante du complément et ses propriétés apoptotiques.
Cette caractérisation a ensuite été étendue à quatre biosimilaires soumis pour enregistrement. La partie clinique
consitait en le développement d'outils d'immunomonitoring et l’évaluation de leur pertinence dans le suivi
thérapeutique du rituximab dans le traitement de polyarthrite rhumatoïde.
Méthode : par emploi de cellules exprimant le CD20, l'interaction rituximab-CD20 a été évaluée par cytométrie
en flux (CMF), Sa CDC par technique au CCK-8 a été optimisée et validée selon l'ICH Q2(R1), sa cytotoxicité
directe a été évaluée avec le test au PrestoBlue et ses propriétés apoptotiques par marquage à l'annexine-V/IP ;
Les biosimilaires CT-P10, GP2013, R-TPR-017 et RTXM83 ont été comparés pour ces paramètres à trois lots du
produit de référence ; le volet clinique est une étude prospective incluant des patients atteints de PR. Le suivi du
traitement s'est étendu sur six mois et l'immunomonitoring a impliqué la quantification des lymphocytes B-CD19
par CMF et la détection des anticorps anti-rituximab par technique ELISA.
Résultats : L’étude de liaison du rituximab au CD20 a révélé suivant un modèle logistique à quatre paramètres
une CE50 moyenne de 3,65 ± 0,33 µg/ml. La technique optimisée de la CDC sur une plage de concentrations de
20 à 0 ,15µg/ml suivant le même modèle a montré une exactitude, précision, une linéarité et une spécificité
satisfaisantes; pour le test au Presto-Blue une corrélation linéaire DO-Concentrations entre 250 et 62,5µg/ml.
Un taux d'apoptose 18% a été observé après 72 heures d'exposition au rituximab et marquage à l’annexine-
V/IP ; Les biosimilaires CT-P10, GP2013, et R-TPR-017 ont montré une liaison au CD20 comparable à celle du
rituximab de référence, tandis que RTXM83 l'a dépassé. Leurs activités CDC relatives étaientcomprises entre
85,44% et 96,1%. Les propriétés apoptotiques étaient comparables excepté le R-TPR-017 ayant induit des effets
supérieurs. Tous les échantillons ont montré des similitudes en termes de teneur en protéines,identification par
SDS-page et pureté par SE-HPLC. Dans l'étude clinique, le rituximab a conduit à la 24e semaine à une
amélioration symptomatique, une baisse des marqueurs inflammatoires, de l'activité DAS28-CRP et une
amélioration de la réponse EULAR, une bonne tolérance du traitement a été notée, 25% des patients n’ont pas
montré de déplétion lymphocytaire et ceci ne semblait pas altérer l’efficacité du traitement, il en est de même
pour la présence des ADA détectée chez 10% des patients, une corrélation positive ADA-CD19 a été notée
(Coefficient de spearman =0 ,523)
Conclusion : la caractérisation fonctionnelle compléte des anti-CD20 nécessite l’intégration de l'évaluation de
la cytotoxicité cellulaire et la phagocytose anticorps-dépendantes, ainsi que l'interaction du fragment Fc avec ses
récepteurs; la confirmation des résultats obtenus pour les biosimilaires requiert un échantillon plus large; une
étude clinique élargie de l'immunomonitoring permettera de confirmer les résultats actuels suggérant que le
décompte des LB-CD19+ pourrait être un indicateur prédictif de l'immunogénicité du traitement. |
| URI: | http://hdl.handle.net/1635/16360 |
| Appears in Collections: | الصيدلة
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